样品中大肠菌群的检验

一、实验材料

1.仪器: 36±1℃温箱、天平、显微镜、平皿、44±0.5℃水浴、试管、吸管、载玻片

2.培养基及试剂:乳糖胆盐发酵管、伊红美兰琼脂培养基、乳糖发酵管、革兰氏染色液、芽孢染色液

二、基本原理

大肠菌群系指一群在37℃24小时能发酵乳糖、产酸、产气需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

食品中大肠菌群数系以每l00ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

三、检验程序

大肠菌群检验程序如下：

四、操作步骤

1．检样稀释

(1)以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理/min作成1: 10的均匀稀释液。

(2)用1ml灭菌吸管，吸取1:10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，作成1:100的稀释液。

(3)另取1ml灭菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。

(4)根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管， 1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24 ±2h ,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

2．分离培养

将产气的发酵管分别转种在伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和芽孢染色以及证实试验。

3．证实试验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

4．报告

根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数。